微生物的质粒携带抗生素耐药性、毒力因子等关键基因，在基因组研究中，识别这些质粒序列对理解基因水平转移、追踪病原体传播至关重要。但传统方法费时费力，直到 PlasFlow 的出现，让这一切变得简单高效。今天我们一起来学习这款超实用的生物信息学工具！

PlasFlow是一套用于预测宏基因组contig中质粒序列的脚本工具。它基于TensorFlow框架的深度人工神经网络（deep artificial neural network）开发，通过训练完整的基因组和质粒序列模型，分析5-7个碱基长度的k-mer频率特征，能够以高达96%的准确率区分质粒和染色体序列。它不仅优于其他现有的宏基因组质粒恢复解决方案，还引入了阈值设置，可以排除不确定的预测结果。

功能特点

高准确率

PlasFlow的准确率高达96%，能够有效区分质粒和染色体序列。
在与cBar等前辈的较量中，PlasFlow展现出压倒性优势：

• • 质粒召回率提升10%（85.98% vs 76.82%）

• • 分类错误率降低3倍（假阳性2.21% vs 6.46%）

常见问题

Q：输入数据需要多长的 contig？
A：建议长度≥1000 bp，过短序列可能影响预测准确性
Q：如何解释输出中的概率值？
A：概率 > 0.9 为高置信度质粒，0.5-0.9 需结合生物学背景判断

超强适应力

不同于传统工具对完整基因组的依赖，PlasFlow专门针对高度碎片化的宏基因组数据设计：

• • 训练时使用10kb短片段，完美适配NGS测序的contigs特征

• • 可处理环状/线性质粒，无需预先知道样本的物种组成

智能分类

可以对序列进行初步分类，帮助研究人员快速了解质粒的潜在功能。其独特之处在于：

• • 双重验证机制：同时考虑不同k-mer长度的特征，通过投票分类器整合结果

• • 概率过滤系统：默认0.7的概率阈值筛除不确定性预测，假阳性率趋近于零

无需分类或功能信息

它可以从组装的宏基因组中恢复质粒序列，无需事先了解样品的分类或功能组成。

环状和线性质粒支持

PlasFlow不仅可以识别环状质粒，还能识别线性质粒。

性能对比与选择建议

工具	准确率	运行时间	输出细节
PlasFlow	96%	快	概率值+过滤选项
PlasmidFinder	88%	较慢	仅已知质粒匹配
CheckM	82%	慢	完整性评估

建议：

• • 优先选择PlasFlow进行高通量筛查

• • 对PlasFlow的可疑结果，用PlasmidFinder进一步验证

• • 结合CheckM评估质粒序列的完整性

应用场景

抗生素抗性研究

质粒是抗生素抗性基因传播的重要载体，PlasFlow可以帮助研究人员快速识别宏基因组中的质粒序列，从而更好地理解抗生素抗性基因的传播机制。

基因组进化研究

通过分析质粒序列，研究人员可以深入了解微生物基因组的进化过程，特别是质粒在基因组重组和基因转移中的作用。

环境微生物学研究

在环境样本中，质粒的分布和多样性可以反映微生物群落的适应性和动态变化。

组装质量验证

区分未组装的染色体片段与真实质粒

合成生物学

快速获取天然质粒骨架用于载体构建

总结

PlasFlow作为一个功能强大的质粒序列预测工具，以其高准确率、无需分类信息和环状线性质粒支持等特点，在宏基因组研究中展现出巨大的潜力。在Galaxy云平台（网址：usegalaxy.cn）上使用PlasFlow，你只需要上传你的FASTA文件（过滤后的fasta），然后选择合适的参数，点击运行即可得到分析结果。平台将生成：

• • 分类统计TSV表格

• • 质粒contigs专属fasta文件

• • 交互式物种分类环形图
  

• 下载结果文件后可结合Prokka进行注释。

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